Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
В колбу помещают 5,00 г испытуемого вещества. Прибавляют 50 мл 2 М раствора калия гидроксида спиртового Р и нагревают на водяной бане в течение 1 ч, часто перемешивая содержимое колбы круговыми движениями. Охлаждают до температуры ниже 25оС и количественно переносят содержимое колбы в делительную воронку, содержащую 100 мл воды Р. Осторожно встряхивают с тремя порциями эфира, свободного от пероксидов Р, по 100 мл каждая. Эфирные слои собирают в другую делительную воронку, содержащую 40 мл воды Р, слегка встряхивают в течение нескольких минут, оставляют до расслоения и отбрасывают водный слой. Эфирный слой встряхивают с несколькими порциями воды Р, по 40 мл каждая, до тех пор, пока водный слой не перестанет давать щелочную реакцию по фенолфталеину. Эфирный слой количественно переносят в колбу, высушенную до постоянной массы, промывая делительную воронку эфиром, свободным от пероксидов Р. Эфир выпаривают с необходимыми предосторожностями, к остатку прибавляют 6 мл ацетона Р. Осторожно удаляют растворитель в токе азота Р. Высушивают до постоянной массы при температуре от 100°С до 105°С, охлаждают в эксикаторе и взвешивают. Остаток растворяют в минимальном объеме метиленхлорида Р.
Испытуемый раствор (b). В колбу вместимостью 150 мл, снабженную обратным холодильником, помещают 5,00 г рапсового масла Р и далее поступают, как указано в приготовлении испытуемого раствора (а), начиная со слов «Прибавляют 50 мл 2 М раствора калия гидроксида спиртового Р».
Испытуемый раствор (с). В колбу вместимостью 150 мл, снабженную обратным холодильником, помещают 5,00 г подсолнечного масла Р и далее поступают, как указано в приготовлении испытуемого раствора (а), начиная со слов «Прибавляют 50 мл 2 М раствора калия гидроксида спиртового Р».
Раствор сравнения. 25 мг холестерина Р и 10 мг бетулина Р растворяют в 1 мл метиленхлорида Р.
Для каждого испытуемого раствора используют отдельную пластинку. На каждую из пластинок наносят полосой размером (20x3) мм 20 мкл раствора сравнения и полосой размером (40x3) мм 400 мкл испытуемого раствора (а) или испытуемого раствора (b), или испытуемого раствора (с), соответственно. Пластинки помещают в камеру со смесью растворителей эфир Р - гексан Р (35:65). Когда фронт растворителей пройдет 18 см от линии старта, пластинки вынимают из камеры, высушивают в токе азота Р, опрыскивают раствором 2 г/л дихлорфлуоресцеина Р в этаноле Р и просматривают в УФ-
свете при длине волны 254 нм. На хроматограмме раствора сравнения обнаруживаются полосы, соответствующие холестерину и бетулину. На хроматограммах испытуемых растворов обнаруживаются полосы с близкими значениями Rf, соответствующие стеринам. С хроматограммы каждого испытуемого раствора снимают область покрытия, на которой расположены полосы стеринов, а также дополнительно зоны на 2-3 мм выше и ниже видимых зон раствора сравнения и помещают раздельно в три колбы вместимостью 50 мл каждая. В каждую колбу прибавляют по 15 мл теплого метиленхлорида Р и встряхивают. Каждый раствор фильтруют через стеклянный фильтр (40) или подходящую фильтровальную бумагу и промывают каждый фильтр тремя порциями метиленхлорида Р, по 15 мл каждая. Объединенные фильтраты и смывы помещают в три колбы, высушенные до постоянной массы, выпаривают до сухого остатка в токе азота Р и взвешивают.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТЕРИНОВ
Определение стеринов проводят методом газовой хроматографии
(2.2.28).
Все операции проводят, защищая растворы и реактивы от влаги, растворы готовят непосредственно перед применением.
Испытуемый раствор. К выделенным из испытуемого вещества методом тонкослойной хроматографии стеринам прибавляют свежеприготовленную смесь: хлортриметилсилан - гексаметилдисилазан Р - пиридин безводный Р (1:3:9). (0,02 мл смеси на миллиграмм остатка). Осторожно встряхивают до полного растворения остатка и оставляют в эксикаторе над фосфора (v) оксидом Р на 30 мин. При необходимости центрифугируют и используют надосадочную жидкость.
Раствор сравнения (а). К 9 частям стеринов, выделенных из рапсового масла Р методом тонкослойной хроматографии, прибавляют 1 часть холестерина Р. К полученной смеси прибавляют свежеприготовленную смесь: хлортриметилсилан - гексаметилдисилазан Р - пиридин безводный Р (1:3:9) (0,02 мл смеси на миллиграмм смеси стеринов). Осторожно
встряхивают до полного растворения остатка и оставляют в эксикаторе над фосфора (V) оксидом Р на 30 мин. При необходимости центрифугируют и используют надосадочную жидкость.
Раствор сравнения (b). К стеринам, выделенным из подсолнечного масла Р методом тонкослойной хроматографии, прибавляют свежеприготовленную смесь: хлортриметилсилана Р - гексаметилдисилазан - пиридин
безводный Р (1:3:9) (0,02 мл смеси на миллиграмм смеси стеринов). Осторожно встряхивают до полного растворения остатка и оставляют в эксикаторе над фосфора (V) оксидом Р на 30 мин. При необходимости центрифугируют и используют надосадочную жидкость.
Хроматографируют на газовом хроматографе с пламенно-ионизационным детектором в следующих условиях:
